尊龙凯时的婴儿利什曼虫探针法荧光定量PCR试剂盒（CAT#: 15-18620）是用于检测婴儿利什曼虫（Leishmania infantum）的专业工具。该原虫能够引发动物源性内脏利什曼病（黑热病），多项研究表明，感染此病原的犬只在某些情况下可能表现为无症状，但仍对疾病传播存在风险。

产品特点

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR原理，具有以下优势：

• 即开即用，用户仅需提供DNA模板。
• 包含阳性对照，方便区分假阴性样品。
• 反应快速且灵敏度高。
• 每件试剂盒可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR，仅供科研使用。

规格及成分

本试剂盒包括以下成分：

运输及保存

本试剂盒需低温运输，需在-20℃下保存，保质期为一年。阳性对照应单独存放，以避免交叉污染。样品DNA及超纯水需自行准备。

使用方法

一、DNA提取（样本制备区）

使用自选方法提取样品DNA，本试剂盒与市场上多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

为避免污染，应在独立区域稀释阳性对照。步骤如下：

1. 标记6个离心管（编号7至2）。
2. 每管加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL阳性对照，震荡1分钟，得到1×10^7拷贝/μL标准样品。
4. 依次在6、5等管中添加稀释样品，直至获得6个稀释度的标准样品。

三、试剂配制（试剂准备区）

准备N+2个qPCR管，其中N为待检样品数量。向每PCR管中添加以下成分：

四、添加模板（模板添加区）

向qPCR管中添加2μL模板，加入顺序为阴性对照、待测样品模板、阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放入PCR扩增仪进行程序如下的扩增：

• 预变性：95℃，3分钟
• qPCR反应（40个循环）：95℃，15秒；58℃，20秒；72℃，20秒（在此过程采集FAM通道的荧光信号）。

六、结果分析

若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，推算样品DNA浓度的log值。若未制作标准曲线，根据以下标准判定结果：

• 阳性对照：Ct值<30，明显指数增长，呈典型S型曲线。
• 阴性对照：Ct值38或无Ct值，无明显增长。
• 样本检测结果的判定依据如下：
• Ct值<35，结果为阳性；
• Ct值38或无Ct值，结果为阴性；
• Ct值在35-38范围需复检，若重复实验中Ct值仍在此范围且有明显增长，判定为阳性，否则为阴性。

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