尊龙凯时致力于推动生物医学领域的研究与创新，以下是关于树突状细胞（DC）培养的历史进展。

1973年：树突状细胞的发现

加拿大科学家Ralph M. Steinman于1973年在美国的洛克菲勒大学首次从小鼠的外周淋巴器官（如脾、淋巴结和派氏集合淋巴结）中鉴定出树突状细胞（DC）。这一发现为未来的免疫研究奠定了基础，并使Steinman于2011年获得诺贝尔生理学或医学奖。

1992年：小鼠DC体外培养的创新

日本京都大学的Inaba在1992年首次通过添加GM-CSF（粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子）成功从小鼠血液和骨髓细胞体外诱导出大量的树突状细胞。这使得Inaba被认为是小鼠DC体外培养的开创者，他的方法被称为小鼠BMDC培养的经典方法。这一系列研究是在Ralph M. Steinman的参与下完成的：

• Inaba采用抗体加补体法去除骨髓中的淋巴细胞，以避免其对BMDC培养的影响。
• 诱导分化时，每两天轻轻摇动培养板并更换3/4体积的培养液，尽量去除粒细胞的干扰。
• Inaba证实仅使用GM-CSF培养6-8天即可从骨髓细胞中诱导大量的成熟DC细胞，每只小鼠可培养出5-7x10⁶个DC细胞。

1994年：GM-CSF与IL-4的联合诱导

1994年，奥地利因斯布鲁克大学的Romani等研究发现，通过联合使用GM-CSF和IL-4可以从人类外周血单个核细胞（PBMC）中制备大量的DC，而单独使用GM-CSF的效果相对较差。此后，这一发现被有效地转移到了小鼠BMDC的培养中。

1999年：DC成熟程度的研究

德国明斯特大学的Labeur研究表明，单独使用GM-CSF诱导的BMDC为未成熟DC，而GM-CSF与IL-4联合诱导的BMDC则显示出中等成熟度。研究进一步发现，添加CD40L或LPS可完全诱导DC的成熟。

1999年：超大规模BMDC培养的方法

德国埃尔朗根大学的Lutz于1999年开发了一种能够获取超大量BMDC的培养方法，每只小鼠可获得的BMDC数量为Inaba经典方法的50倍，达到1-3x10⁸个DC细胞。这种方法因其简便而受到DC研究者的广泛认可，其步骤包括：

• 骨髓不进行任何预先处理。
• 使用细菌培养皿替代细胞培养板。
• 细胞初始铺板密度低，为2x10⁵/ml。
• 培养时间延长至10-12天。
• 继续仅用GM-CSF诱导，但在第8或第10天后逐渐减量使用。
• 第6天和第8天进行半量换液，吸出的悬浮细胞进行离心后放回原板。

2002年：大规模BMDC培养的进展

2002年，美国匹兹堡癌症研究院大学的Son研发出另一种超大规模BMDC培养方法，称为bulk-culture method，其优势是每只小鼠可获得3-4x10⁷个BMDC，数量为Inaba经典方法的7-10倍，同时培养时间仅需7天。该方法的步骤如下：

• 取出骨髓后仅进行溶血处理。
• 使用6孔培养板进行培养。
• 在培养过程中结合使用GM-CSF与IL-4进行诱导。
• 在第4天和第7天时补充足量的GM-CSF与IL-4。

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